酪蛋白巨肽(Casein Glycomacropeptide, CGMP)是一種由凝乳酶(或胃蛋白酶)水解酪蛋白中K-casein的Phe105-Met106的肽鍵得到的具有64個(gè)氨基酸殘基的短肽。CGMP具有多種生物活性。目前酪蛋白糖巨肽的生產(chǎn)主要是從乳清中提取,由于乳清中乳糖、乳清蛋白等的存在,使大規(guī)模生產(chǎn)CGMP存在一定的技術(shù)困難。本文以干酪素為原料,從干酪素的溶解、凝乳酶酶解條件、CGMP的初提、精制以及產(chǎn)品的成分測(cè)定等方面,研究了凝乳酶酶解干酪素制備CGMP的工藝。 通過研究氫氧化鈉濃度,干酪素溶解量與CGMP得率的關(guān)系,得到最佳的溶解條件為：氫氧化鈉濃度0.16mol/L,干酪素的溶解量為6g/100mL。 結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,采用Minitab軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),對(duì)影響酶解的主要因素進(jìn)行了篩選,結(jié)果表明酶解的時(shí)間、溫度、pH、酶與底物比是影響酶解的主因素。根據(jù)Minitab的分析結(jié)果,采用Design Expert軟件中響應(yīng)面設(shè)計(jì)及分析對(duì)酶解主因素進(jìn)行了優(yōu)化,得到的最佳酶解條件為：酶解時(shí)間80min、酶解溫度42.5℃、酶解pH6.28、酶與底物比270U/g。此時(shí)酪蛋白糖巨肽的得率為17.91mg/g干酪素。 在酪蛋白糖巨肽的分離純化部分,考察了不同絮凝劑在CGMP初提中的效果、絮凝法與等電點(diǎn)沉淀法的優(yōu)劣、超濾的最佳條件、離子交換樹脂的最佳條件等。結(jié)果表明殼聚糖、硫酸鋁鉀、硫酸鋁等三種絮凝劑的絮凝效果較好,但不如等電點(diǎn)沉淀法；超濾的單因素實(shí)驗(yàn)表明,超濾的最佳條件是：壓力0.276Mpa、轉(zhuǎn)速400r/min、樣品pH7.5。篩選的陰離子交換樹脂D280對(duì)CGMP的分離效果較好,適合工業(yè)化生產(chǎn)。通過離子交換樹脂的吸附及洗脫條件研究,確立其最適的分離條件為：進(jìn)樣體積1/10BV(柱床體積),樣品pH7.5,采用0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L的NaCl溶液梯度洗脫,洗脫速度1BV/h,各梯度洗脫體積2BV,CGMP被洗脫的NaCl溶液濃度為0.5mol/L。SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果表明,洗脫液中CGMP的條帶單一,洗脫效果較好。 經(jīng)過噴霧干燥法制得3種不同純度的CGMP樣品,根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),測(cè)定樣品相關(guān)理化指標(biāo)。結(jié)果表明CGMP樣品的糖基化度和純度較高,符合產(chǎn)品的衛(wèi)生指標(biāo)。

作者：佚名　　來源：知網(wǎng)空間